Job Description

• Research student in the project on biodegradable microneedle patches containing phage, which represents a novel approach to the treatment of infected wounds.

Job Description

• จะปฎิบัติงานเกี่ยวกับการวินิจฉัยโรคที่เกิดจากเชื้อแบคทีเรีย โดยในการฝึกงานจะแบ่งออกเป็น 6 station ซึ่งแต่ละ station จะฝึกอยู่ที่ประมาณ station ละ1สัปดาห์
• ????Station ที่1 :เตรียมตัวอย่างหรือ specimen ลงใน plate
• ✅สิ่งแรกที่ต้องทำคือ นำ Specimen จากห้องรับสิ่งส่งตรวจ แล้วทำการนำ specimen มาใส่ในกล่องที่ได้เตรียมไว้ และUrine จะแช่อยู่ในตู้เย็น โดยจะนำspecimenออกมาพร้อมกับใบข้อมูลของคนไข้
• - specimen ( สิ่งส่งตรวจ ) เช่น sputum, hemoculture, bronchoalveolar lavage (BAL), CSF, urine, pus, stool, น้ำเจาะต่างๆ เช่น น้ำเจาะปอด น้ำเจาะท้อง เป็นต้น
• * ทำการแยก specimen ที่ได้มาออกเป็น 4 กลุ่ม ได้แก่ hemoculture, urine, stool และ miscellaneous ( นอกเหนือจาก 3 กลุ่มแรกที่กล่าวมา เช่น sputum, pus, BAL , น้ำเจาะ )
• * เช็คในใบข้อมูลของคนไข้ ว่าหมอสั่งให้ทำการตรวจอะไรบ้าง เช่น culture, ย้อม gram stain, ย้อม AFB stain, Gene X pert, fungus , TB culture
• * ทำการ label เลขในใบข้อมูลของคนไข้และสิ่งส่งตรวจให้ตรงกัน
• -โดยการใช้สัญลักษณ์ u แทน urine แล้วตามด้วยตัวเลข เช่น u1 เป็นต้น
• - ใช้สัญลักษณ์ s แทน stool เช่น s1 เป็นต้น
• - miscellaneous และ hemoculture จะไม่มีการใช้สัญลักษณ์ แต่จะเขียนด้วยตัวเลขไปได้เลย
• * ลง specimen ในอาหารเลี้ยงเชื้อ ในกรณีที่ใบข้อมูลคนไข้มีการสั่งให้ย้อม gram stain, ย้อม AFB stain ต้องลง specimen บนสไลด์ด้วย
• * hemoculture จะนำเข้าตู้ hemoculture ก่อน โดยเครื่องนี้จะใช้หลักการยิงแสงฟลูออเรสเซนซ์ เมื่อขึ้นสีแดงที่หน้าตู้ หมายถึง hemoculture positive (พบเชื้อ) จึงสามารถนำออกมาทำการ culture ได้
• ???? การลง specimen บนอาหารเลี้ยงเชื้อ
• * urine : ลง BA, MCA
• * miscellaneous : ลง CA, BA, MCA *กรณีน้ำเจาะต่างๆหรือ body fluid ต้องลง FTM หรือ Fluid Thioglycolate medium ด้วย
• * pus (หนอง) : ลง BA, MCA *กรณี pus ที่มาจากอวัยวะสืบพันธ์ให้ลง CA ด้วย
• * Stool (อุจจาระ) : ลง TCBS, XLD
• * hemoculture : ลง CA, BA, MCA และ ลงสไลด์
• ???? อาหารเลี้ยงเชื้อที่ควรทราบ
• * CA(chocolate agar), BA(Blood agar) : ใช้ในการตรวจหาเชื้อแบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบ
• * MCA (MacConkey agar) : ใช้ในการตรวจหาเชื้อแบคทีเรียแกรมลบ
• * TCBS (Thiosulfate Citrate Bile salts Sucrose agar) : ใช้ในการตรวจหาเชื้อ Vibrio sp. ( Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus )
• * XLD (Xylose lysine Dextrose agar) : ใช้ในการตรวจหาเชื้อ Salmonella sp. และ Shigellla sp.
• * FTM : ใช้ทดสอบการเจริญของเชื้อแบคทีเรียชนิดที่ใช้ออกซิเจน(aerobe)และไม่ใช้ออกซิเจน(anaerobe)
• * ขั้นตอนการลง specimen บนอาหารเลี้ยงเชื้อ ต้องลงจาก CA > BA > MCA > slide > FTM
• * ทำการ streak เป็น 4 ระนาบ **(ระนาบที่1และระนาบที่4ห้ามชนกัน)**
• * ในกรณีของ miscellaneous ที่ลงบน BA ต้องขีดด้วย S. aureus ในระนาบที่ 1 และระนาบที่ 4
• * ในกรณี urine และ BAL ที่ลงบน BA จะใช้ calibrate loop ลงเป็นรูปตัว Tแล้วทำการstreak ให้ทั่วผิวหน้าวุ้น
• * ทำการนำเข้าตู้บ่ม
• - MCA, TCBS, XLD จะบ่มที่ตู้ 37 องศาเซลเซียส
• - BA, CA บ่มที่ตู้ 37 องศาเซลเซียส ( CO2 )หรือตู้คาร์บอน
• * ลงทะเบียนข้อมูลคนไข้ โดยทำการติดสติ๊กเกอร์ชื่อและข้อมูลยาจากใบข้อมูลคนไข้ลงในสมุดทะเบียน พร้อมปั๊มวันที่ให้เรียบร้อย และลงทะเบียนเข้าระบบของโรงพยาบาลโดยใช้ระบบที่เรียกว่า mLAB
• ???? station ที่ 2 : ย้อมสี
• ในทุกวันของการเริ่มต้นการย้อมแกรมต้องทำการย้อม slide control ด้วย
• ????การย้อมสีแกรม ( gram stain ) : เพื่อแยกความแตกต่างระหว่างแบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบ
• - ทำการ smear ทิ้งไว้ให้แห้ง แล้วทำการ heat fix
• - หยดสี crystal violetให้ท่วม smear ทิ้งไว้ 10 วินาทีแล้วล้างน้ำ
• - หยด gram iodine ให้ท่วม smear ทิ้งไว้ 1 นาที แล้วล้างน้ำ
• - หยด decolorize ประมาณ 5 วินาที แล้วล้างน้ำออก
• - หยดสี safranin ให้ท่วม smear ทิ้งไว้ 10วินาที แล้วล้างน้ำ
• ????การย้อม acid - fast stain โดยวิธี ziehl neelsen :เพื่อตรวจหาเชื้อแบคทีเรียที่มีผนังเซลล์ทนกรด โดยเฉพาะเชื้อในกลุ่ม Acid-fast Bacilli เช่น mycobacterium tuberculosis,Mycobacterium leprae เป็นต้น
• ขั้นตอนเริ่มจาก…….
• - ทำการ smear ทิ้งไว้ให้แห้ง แล้วทำการ heat fix
• - หยดสี carbol fuchsin ให้ท่วม smear ใช้ไฟลนให้พอขึ้นไอ อย่าให้เดือด ทิ้งไว้ 3-5 นาทีแล้วล้างน้ำ
• - ล้างสีออกด้วย 3% HCL ใน 95% alcohol แล้วล้างน้ำ
• - หยดสี methylene blue ให้ท่วม smear ทิ้งไว้ 1 นาที แล้วล้างน้ำ
• ????การย้อม AFB fluorescent stain : เพื่อตรวจสอบเชื้อ Mycobacterium sp. ( แบบเรืองแสง )
• - มีทั้งการใช้เครื่องย้อมและการย้อมด้วยมือปกติ ส่วนมากจะเน้นการใช้เครื่องมากกว่า เพราะ ง่าย มีความสะดวกและรวดเร็ว
• - โดยการใช้เครื่อง AFB auto stainer AT -2000F fluorescent ทำการใส่ slide ที่ทำการ smear และ heat fix เรียบร้อยแล้วใส่เข้าไปในเครื่อง เมื่อใส่ slide เข้าเครื่องแล้วให้กรอกจำนวน slide ที่ได้ใส่เข้าไป และกดปุ่มเริ่มทำงานได้ รอประมาณ 15 นาที
• - การย้อมด้วยมือ ให้หยดสี 0.3% Auramine ให้ท่วมรอย smear ทิ้งไว้ 15 นาทีแล้วล้างน้ำ ตามด้วยหยดน้ำยา 0.5% acid alcohol ทิ้งไว้ 2 นาทีแล้วล้างน้ำ และขั้นตอนสุดท้ายหยดสี 0.5% potassium permanganate ทิ้งไว้ 1 นาทีแล้วล้างน้ำ นำslide ไปตากไว้บน heater
• ????การย้อม modified acid-fast stain : เพื่อตรวจสอบเชื้อ Nocardia sp. และ Rhodococcus sp.
• - ทำการ smear ทิ้งไว้ให้แห้ง แล้วทำการ heat fix
• - หยดสี carbol fuchsin ให้ท่วม smear ทิ้งไว้ 3-5 นาทีแล้วล้างน้ำ
• - ล้างสีออกด้วย 1% sulfuric acid แล้วล้างน้ำ
• - หยดสี methylene blue ให้ท่วม smear ทิ้งไว้ 1 นาที แล้วล้างน้ำ
• ???? station ที่ 3 : ส่องกล้องจุลทรรศน์
• * ส่องกล้องจุลทรรศน์แบบ light microscope : โดยเริ่มต้นจากการดูที่กำลังขยาย 10x เมื่อเจอเชื้อแล้วให้ทำการหยด immersion oil แล้วหมุนไปที่กำลังขยาย 100x
• - hemoculture : ทำการดูลักษณะการติดสี รูปร่าง และการเรียงตัวของเชื้อ เช่น gram positive cocci cluster ,gram positive palisade เป็นต้น
• - urine และ miscellaneous : ทำการเกรดปริมาณของ white blood cell ,Red blood cell (แต่ส่วนมากจะไม่ค่อยเจอ) และ epithelial cell แล้วรายงานผลเป็น rare, few, moderate และ numerous ***(โดยจะทำการเกรดปริมาณที่หัว40x)จากนั้นทำการดูลักษณะการติดสี รูปร่าง และการเรียงตัวของเชื้อ***(จะทำการเกรดปริมาณที่หัว100x)โดยในกรณีของ gram negative ไม่ต้องบอกการเรียงตัวของเชื้อ เช่น
• gram positive bacilli ( Chinese latter ) , gram negative bacilli
• * ส่องกล้องจุลทรรศน์แบบ fluorescent : ทำการดูเพียงกำลังขยาย 40x
• เชื้อที่ให้ผลบวก ( Mycobacterium sp. ) มีรูปร่างเป็นแท่ง ลักษณะเรียวยาว ให้การเรืองแสงสีเหลืองของสี Auramine แล้วจากนั้นทำการเกรดปริมาณเป็นrare,scanty,+1,+2,+3 เป็นต้น
• ????station ที่ 4 : อ่าน plate ( miscellaneous, urine )
• * ????ช่วงเช้า
• - การอ่าน plate miscellaneous : โดยทำการอ่านทั้งหมด 4 ข้อ ได้แก่
• 1.เกรดปริมาณจำนวนโคโลนี แล้วรายงานผลเป็น rare, few, moderate และ numerous
• 2.ขนาดของโคโลนี เช่น tiny, small, medium และ large
• 3.สีของโคโลนี เช่น white, grey, green และ yellow mustards
• 4.ลักษณะเพิ่มเติม เช่น mucoid, แผ่ และ hemolysis(บนBA)
• * บน MCA : รายงานผลเป็น LF และ NLF
• - การอ่าน plate urine
• 1.บน BA : เกรดปริมาณจำนวนโคโลนี เป็น 10^3, 10^4-5 และ >10^5
• 2.บน MCA : รายงานผลเป็น LF และ NLF
• เมื่ออ่าน plate เรียบร้อยแล้ว ทำการเขี่ยโคโลนีทุกตัวที่ขึ้นบน plate ใส่ลงใน TSB แล้วทำการนำเข้าตู้บ่ม 37 องศาเซลเซียส ****(โดยใน plateที่เราได้ทำการอ่านนั้นห้ามมีเชื้อเกิน3ชนิด ถ้าหากมี3ชนิดให้รายงานเป็น mix bacterial growth แต่ถ้าหากเกิน3 ชนิดให้ทำการ Reject)****แล้วหลังจากนั้นทำการเขี่ยเชื้อจากที่เราได้อ่าน โดยทำการlabel tubeที่มีTSB เขี่ยเชื้อใส่ลงไป เชื้อ1ชนิด/TSB1หลอด แล้วเขี่ยใส่ครบก็นำไปบ่มในตู้37องศาเซลเซียส โดยใช้เวลาประมาณ 2-3ชั่วโมง
• ในกรณีของเชื้อที่ขึ้นบน plate เป็นลักษณะของโคโลนีเชื้อตัวเดียว สามารถนำเข้าเครื่อง vitex ได้ ซึ่งเป็นเครื่องที่ใช้ในการ identification และ บอก sensitivity ของยา (แต่ส่วนมากที่เข้าเครื่องvitex มักจะเป็นเชื้อแกรมลบตัวเดียวและแกรมบวกบางตัว ตามความเหมาะสม)
• ** ????ช่วงบ่าย **
• ทำการป้ายเชื้อจากหลอด TSB จากช่วงเช้าลงใน MHA, MHA + 5% sheep blood ( สำหรับกลุ่ม Streptococcus sp.)และ BA (สำหรับกลุ่ม alpha hemolysis) เพื่อทำการปั๊มยาต่อไป
• ซึ่ง TSB จะมีลักษณะ 2 แบบคือ ขุ่น(เชื้อหมักน้ำตาล glucose) และ ใส (เชื้อไม่หมัก น้ำตาล glucose) หลอดที่ขุ่นจะต้องทำการปรับความขุ่นด้วย normal saline solution ให้ได้ความขุ่น 0.5 McFarland standards ก่อนการป้ายลงบน plate โดยจะใช้ cotton swab ในการป้าย
• - ลง Biochem test [กลุ่มแกรมลบและกลุ่มแกรมบวก BE ( Streptococcos sp. และ Enterococcus sp.) ]
• -TSB ขุ่น : ลง TSI, LIM, citrate, urea และ malonate
• -TSB ใส : ลง TSI, LIM, citrate, OF-Glu, OF-mal และ OF-lac
• -กลุ่ม BE : ลง bile esculin, 6.5% NaCl, arabinose, PPR และ
• 0.04% potassium tellulite
• - กลุ่ม gram positive cocci cluster ที่ทดสอบ catalase test แล้วให้ผลบวก ให้ลง coagulase test เพื่อทดสอบเชื้อ S. aureus
• ????station ที่ 5 : identification
• *???? ช่วงเช้า
• - อ่าน biochemical test จากนั้น inden ออกมาเป็นชื่อเชื้อ genus พร้อม species แล้วบันทึกผลในสมุดทะเบียนของผู้ป่วยแต่ละราย
• - แกรมลบทดสอบ oxidase test ทุกครั้ง
• - อ่านผลจากการทำ disk diffusion โดยการวัด clear zone ด้วยไม้บรรทัด แต่ใน MHA + 5% sheep blood ให้วัดด้วย vernier caliperหรือไม้บรรทัด
• - ลงข้อมูลเชื้อในระบบของโรงพยาบาล
• * ????ช่วงบ่าย
• - ปั๊มยา ลงใน plate ที่ได้ป้ายเชื้อไว้จาก station ที่ 4
• - การปั๊มยา แบ่งได้เป็น 3 กลุ่ม คือ
• 1.กลุ่ม staphylococcus sp. : ปั๊มยา streptococcus sp.(st)
• 2.กลุ่ม BE : ปั๊มยา BE และ Streptococcus sp.(st)
• 3.กลุ่มแกรมลบ : ปั๊มยา R1, Rใส และ Rขุ่น
• ????station ที่ 6 : อ่าน plate ( hemoculture )
• * ????ช่วงเช้า
• อ่านเชื้อที่ขึ้นบน plate คล้ายๆกับ การอ่าน plate miscellaneous แต่ hemoculture จะอ่านได้ง่ายกว่าเนื่องจากเชื้อที่ขึ้นบน plate โดยส่วนใหญ่จะเป็นเชื้อตัวเดียว และไม่ต้องทำการเกรดปริมาณ อ่านแค่ขนาดและสีของโคโลนีเท่านั้น จากนั้นเขี่ยเชื้อทุกตัวที่ขึ้นบน plate ใส่ลงใน TSB
• *ในกรณีของกลุ่มแกรมลบและแกรมบวกที่มี hemo 2 ขวดจากผู้ป่วยคนเดียวกัน ให้นำเข้าเครื่อง vitex
• * ????ช่วงบ่าย
• ทำเหมือนกับช่วงบ่าย ของ station ที่ 4
• บางสัปดาห์ทางตึกต่างๆของโรงพยาบาลจะมีการส่งตัวอย่างน้ำประปามาให้ตรวจ ซึ่งจะใช้การตรวจแบบ PMN
• และในบางวันจะมีได้ทำการวิเคราะห์หาเชื้อโดยใช้เครื่อง MALDI-TOF และ VITEK ซึ่งจะทำให้iden หาเชื้อได้เร็วขึ้น
• ???? 1. การนำเชื้อเข้าเครื่อง MALDI-TOF MS
• MALDI-TOF ใช้หลักการแยกชนิดของเชื้อจาก “โปรตีน” ที่อยู่บนผิวเซลล์ ซึ่งให้ลายนิ้วมือโปรตีนเฉพาะสำหรับแต่ละชนิดของจุลชีพ
• ✅ ขั้นตอนหลัก:
• 1.1 การเพาะเชื้อ
• ใช้เชื้อจาก pure colony (เพาะบนวุ้น blood agar หรือ nutrient agar อย่างน้อย 18–24 ชั่วโมง)
• 1.2 เตรียม slide (target plate)
• หยิบเชื้อจำนวนเล็กน้อย (ป้ายคล้ายแต้ม Gram) ไปวางที่ตำแหน่งบน MALDI target plate
• ตำแหน่ง 1 ช่องสำหรับเชื้อ 1 ตัวอย่าง
• 1.3 เติม matrix
• หยดสาร matrix solution (เช่น α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid - HCCA) ลงบนจุดที่ป้ายเชื้อ (1–2 µL) ปล่อยให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง (ประมาณ 5–10 นาที)
• 1.4 โหลดเข้าเครื่อง
• ใส่ target plate เข้าเครื่อง MALDI-TOF MS
• เครื่องจะยิงเลเซอร์ทำให้โปรตีนไอระเหยและวัด mass/charge ratio (m/z) ระบบจะเทียบกับ database เพื่อบอกว่าเชื้อนั้นคืออะไร
• ✅ ผลลัพธ์:
• ใช้เวลาประมาณ 5 นาที
• ให้ผลเป็นชื่อของแบคทีเรียหรือรา พร้อมคะแนนความมั่นใจ
• ???? 2. การนำเชื้อเข้าเครื่อง VITEK 2 (เช่น bioMérieux)
• VITEK 2 เป็นระบบ automated สำหรับ ระบุชนิดเชื้อ และทดสอบความไวต่อยาต้านจุลชีพ โดยใช้ card เฉพาะ
• ✅ ขั้นตอนหลัก:
• 2.1 เตรียม pure colony
• ใช้เชื้อจากเพลตเพาะเชื้อ 18–24 ชม. ใช้cotton swab ป้ายเชื้อลงในหลอดน้ำเกลือ
• 2.2 ปรับความขุ่น
• ปรับความขุ่น ให้เท่ากับ McFarland 0.5–0.63 โดยใช้เครื่องวัดความขุ่น (DensiCHEK หรือเครื่องวัด turbidity) ซึ่งเป็นขั้นตอนที่สำคัญมากเพื่อให้จำนวนเซลล์สม่ำเสมอ
• 2.3 เลือกชนิดของ card
• VITEK ID card: สำหรับระบุชนิดเชื้อ (ID card มีให้เลือกหลายแบบ เช่น GN สำหรับแกรมลบ, GP สำหรับแกรมบวก) VITEK AST card: สำหรับตรวจความไวต่อยาปฏิชีวนะ (เช่น AST-N263, AST-P628 แล้วแต่กลุ่มเชื้อ)
• 2.4 โหลดเชื้อใส่ card
• ระบบจะดูดเชื้อจากหลอด suspensions เข้าสู่ card อัตโนมัติ
• นำ card + หลอด suspension เข้าเครื่อง VITEK 2
• 2.5 บ่มเชื้อและวิเคราะห์
• เครื่องจะบ่ม card ที่อุณหภูมิ 35–37°C
• ภายใน card มีช่องใส่สารทดสอบ >60 ช่อง เครื่องจะถ่ายภาพวิเคราะห์การเจริญเติบโตของเชื้อในแต่ละช่อง
• ✅ ผลลัพธ์:
• ใช้เวลาประมาณ 15นาที
• รายงานชื่อเชื้อชนิดเดียวกับ MALDI-TOF หรือใกล้เคียง
• รายงานค่าความไวต่อยาเป็น MIC และ S / I / R (Sensitive / Intermediate / Resistant)

Job Description

• Main Responsibilities
• Cashier
• Process payments in cash, card, or app, and provide accurate change.
• Stocking
• Restock products, organize items on shelves, and check expiration dates.
• Maintain store cleanliness
• This includes sweeping, mopping, wiping counters, and ensuring the overall area is clean.